分享看?ELISA試劑盒新老手的操作

ELISA試劑盒檢測體系可謂是免疫學反響應(yīng)用到科研出產(chǎn)中zui為敏捷的技術(shù)手段。自己也為此苦惱過很長一段時間，跟著自己技術(shù)水平得前進，或多或少地也把握了ELISA試劑盒體系的脾氣，也是游刃有余吧，現(xiàn)在做方陣，做ELISA試劑盒已是輕車熟路了，曾經(jīng)檢測一種抗體用整整一下戰(zhàn)書還算得暈暈的，現(xiàn)在給我十個八個的從包被到顯色，一個工作日根本搞定。

包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其辨認，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時，ELISA試劑盒師兄都嚴格正告我必定要在冰浴下緩慢消融就是這個道理。封閉就是讓很多不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑，然后排擠ELISA試劑盒后的過程中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時由于實驗的需要，包被原的特殊性也可能選用中性的緩沖溶液來包。

小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才干固定在固相載體上。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)咱們要事前對其改造再加以包被，親和素生物素:先親和素先包被載體，參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、結(jié)實，已擴大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。常用的包被液除了方才說到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

過程中老是會泛起或大或小的標題，本人在剛開始做ELISA試劑盒時就面臨良多災(zāi)題，固然有師兄師姐鋪路，但仍是常常做得烏煙瘴氣，比如說花板，假陽性，全顯色，悉數(shù)顯色，顯色比空缺還低。

由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間的效果，ELISA試劑盒這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體外表。