ELISA試劑盒中抗原與抗體的影響因素

抗原是能在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)。小分子化合物在與大分子蛋白質(zhì)結(jié)合后能引起機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體的，稱為半抗原（hapten）。抗原進(jìn)入機(jī)體后，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和引起細(xì)胞免疫。例如某些激素、藥物等。能在機(jī)體中引起抗體產(chǎn)生的抗原多為分子量大于5000的蛋白質(zhì)。ELISA是一種免疫測定。一個抗原分子可帶有不同的決定簇。在免疫測定中，抗原是指能與抗體結(jié)合的物質(zhì)。在臨床檢修中主要通過抗原抗體反應(yīng)檢測體液中的抗體或抗原性物質(zhì)。抗原的反應(yīng)性取決于抗原決定簇（antigenic determinant），或稱為表位（epitope）。免疫測定（immunoassay，IA）是應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)測定標(biāo)本的方法。
IgG和IgM的重鏈分別稱為γ（gamma）鏈和μ（mu）鏈。抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤模?kappa;（kappa）和λ（Lambda）兩種型別。Ig分五類，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE.與免疫測定有關(guān)的Ig主要為IgG和IgM.Ig由兩個輕鏈（L）和兩個重鏈（H）的單體組成。五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG的結(jié)構(gòu)見圖。
IgG可被木瓜蛋白酶分解為三個區(qū)段，其中兩個相同的區(qū)段稱抗原結(jié)合片斷（Fab）。兩者構(gòu)成抗體的抗原結(jié)合部位，只與相應(yīng)的抗原決定簇匹配，發(fā)生特異性結(jié)合，是抗體專一性結(jié)合抗原的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。每個Fab都保留結(jié)合抗原的能力，但只有一個抗原結(jié)合位點，是單價的，與抗原結(jié)合后不泛起凝集或沉淀。另一區(qū)段稱Fc段，無抗體活性，但具有IgG*的抗原性。重鏈和輕鏈的N真?zhèn)€氨基酸排列順序因各種抗體而異，稱為可變區(qū)，分別用VH和VL表示。
如將多種抗原或含有多個抗原決定簇的抗原注入機(jī)體，則將由多系的B細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的多種抗體，這些抗體均存在于免疫血清中。含有抗體的血清稱為抗血清。免疫測定中所用的抗血清一般用抗原免疫兔、羊或馬制得。將免疫的脾細(xì)胞（含產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞）與小鼠腫瘤細(xì)胞融合，分離雜交瘤細(xì)胞，接種于小鼠腹腔，產(chǎn)生的腹水中含有濃度很高的單克隆抗體。每一系B細(xì)胞只產(chǎn)生針對某一抗原決定簇的抗體。單克隆抗體通常用抗原免疫小鼠制備。產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞可在體外與繁殖力強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞。將單個雜交瘤細(xì)胞分離，在體內(nèi)或體外培養(yǎng)而分泌的抗體單克隆抗體。單克隆抗體僅針對一種抗原決定簇，具有很高的特異性。